ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)-如何選擇*優(yōu)化的包被條件？

ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)-如何選擇*優(yōu)化的包被條件？

1.包被抗原的選擇

包被抗原可分為天然蛋白、重組蛋白和小分子抗原三大類(lèi).天然蛋白需經(jīng)純化才能用直接吸附法包被,對(duì)于含雜質(zhì)較多的抗原可以采用間接捕獲法包被(先用能夠與目的抗原反應(yīng)的物質(zhì)如抗體直接吸附在酶標(biāo)板上,再通過(guò)特異性反應(yīng)使抗原固相化).ELISA試劑盒經(jīng)純化的重組蛋白一般皆可直接包板.小分子抗原比如多肽以及一些小分子有機(jī)化合物,由于分子量太小,往往難于直接吸附在酶標(biāo)板上,一般都先使其與無(wú)關(guān)蛋白質(zhì)如BSA等偶聯(lián),偶聯(lián)物吸附于固相載體上.

2.包被液的選擇

一般常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液,如果包被的抗原在堿性條件下不穩(wěn)定的話,也可以使用pH7.2的磷酸鹽緩沖液.

3.包被溫度的選擇

通常是4-8度條件下過(guò)夜或者37度保溫2小時(shí),我們強(qiáng)烈建議4-8度條件下包被,有利于蛋白活性的保持.

4.ELISA試劑盒包被濃度的選擇

包被的*適濃度隨固相載體和包被物的性質(zhì)變化,一般蛋白質(zhì)的包被濃度為1-5ug/ml,要明確針對(duì)特定包被抗原的*適包被濃度需要通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定.